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药融圈第136场专享会嘉宾：爱必信生物创始人 中科院博士教授 前纽约大学医学院资深研究科学家 彭毅博士
爱必信生物创始人：彭毅博士
一、由甾醇生产孕酮
1、P450scc、FDX、FDXR，很难表达，尤其是 P450scc ， 和FDXR ；
2、价格都很贵， FDXR， 2ug。价格上差不多是要5000多元。
第二个瓶颈：
1、 P450scc 、FDX、FDXR的活性测定，尤其是P450scc的活性测定 ；
2、FDX、FDXR 没有非常成熟的活性测定方法，且测定方法繁琐；
3、P450scc 测定方法更加复杂（不能准确的定量），需要用到一氧化碳差异色谱( CO剧毒 )；
第三个瓶颈：构建反应，生成产物。只有在保证各种酶活性的前提下，再加入各种辅助因子，才能生成产物。
二、瓶颈问题的解决：
1、优化各种表达策略及各种表达条件，使三种蛋白得到高效表达；
2、确定了P450scc、FDX、FDXR 三种酶活测定方法。其中P450scc是整个反应中最关键的酶，其酶活高低对反应的建立，尤其重要。
正式确定了P450scc可行的酶活测定方法后，我们测定了原始P450scc酶活不够，从而对原始的P450scc蛋白结构做了改造，使之酶活得到大幅度提高。
只有在保证三种蛋白活性的前提下，加入各种辅助因子，才能生成产物。
确定了酶活测定方法，才能知道酶活的高低，才能对原始的酶加工改造，使之酶活提高。
三、目前项目进展
1、目前我们用我们重组表达的各种酶，生成产物孕烯醇酮 氧化那一步非常容易；
2、 体内反应得到产物孕烯醇酮也基本解决；
3、利用微生物培养技术，在微生物发酵和蛋白表达的同时，加入底物甾醇类物质，蛋白表达结束后，直接收集产物孕酮，有望短期内得到解决。
该项目最关键的一点是，需要保证重组蛋白P450scc高效表达，并且酶活高，这一步我们已经解决。
1、绿色环保，无污染；
2、有望得到较之化学合成生成孕酮更高的转化效率；
3、成本低（ 底物植物甾醇非常便宜 )。
体外反应中，酶的稳定性不是很好，但如果要产业化，肯定是要做体内反应。所以，如果要工业化，后面有许多工作要做，还是像刚才说的，利用微生物培养技术，在微生物发酵和蛋白表达的同时，加入底物甾醇类物质，蛋白表达结束后，直接收集产物孕酮，有望短期内得到解决。如果是体内反应，成本不高，不然发酵中需要好几个菌种，不好处理 。这个项目最终是一个菌种，在发酵的同时，各种蛋白高效表达，加入底物。 我们的方法是我们自己慢慢摸索出来的，公司主营业务是销售产物， 在这里只是给大家提供一种思路， 当然我这种方法会有种种问题， 不一定适合当下的产业化。
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